CFSE , eller carboxyfluorescein - succinimidyl - ester är en fluorescerande cellfärgning lösning som används i lymfocytmigration studier . Lymfocyter är de blodets vita blodkroppar som har förmågan att flytta ut ur blodet att fånga främmande mikroorganismer , spelar en viktig roll i immunförsvaret - försvaret . CFSE kan också användas för att märka tymocyter och embryonala , enligt " Immunology and Cell Biology . " Mänskliga Lymphocite färgningsprotokollet
Tekniker bereda en cellsuspension med 20 miljoner celler per ml i 0,1 procent fetalt bovint serum ( FBS) och fosfatbuffrad saltlösning ( PBS). De lägger CFSE och låt fjädring sitta i åtta minuter , enligt University of Kansas Medical Center . Förvärmda FBS tillsätts sedan och cellerna inkuberas i ett vattenbad vid 98,6 grader Fahrenheit under 10 minuter. Cellerna därefter centrifugeras i fem minuter , är supernatanten bort och cellerna tvättas i en lösning av 2 procent FBS /PBS tre gånger . Cellerna fixeras med paraformaldehyd . Centrifugera blodprov , vilket eliminerar de röda blodkropparna
Förenklad CFSE färgningsprotokollet
tekniker . Senare , tvätta de lymfocyterna med PBS för att avlägsna fritt protein . För att kunna observera celldelning efter två dagar, CFSE tillsätts i låg koncentration för åtta minuter , varefter reaktionen är blockerat med fetalt kalvserum. Celler tvättas två gånger med PBS /FCS. Detta protokoll kan användas i " in vivo " eller " in vitro"- försök , enligt The Hedrick Lab vid University of California . Addera ditt protokoll för aktivering av naiva CD8 T-celler i vitro
en naiv T-cell är en lymfocyt som har differentierat i benmärgen . Denna celltyp anses mogen och celler reagerar på nya patogener som immunförsvaret har aldrig stött på . Tekniker inkubera Influensavirus och cellprover på is under 30 minuter , centrifugera och fortsätt inkuberingen under 18 timmar vid 98,6 grader Fahrenheit. Senare cellerna färgas med CFSE och resultat analyseras enligt flödescytometri .
