LacZ är en bakteriell gen som producerar enzymet beta - galaktosidas , som bryter ner laktos till glukos och galaktos . Enzymet klyver även föreningen X-gal , som producerar en blå färg som molekylärbiologer använda som en markör eller rapportör för att spåra närvaron av LacZ-genen i celler. Transfektion
Forskare länka LacZ-genen med en gen av intresse , såsom insulin, med ett fragment av DNA som kallas en plasmid. De använder kemiska eller elektriska transfektion metoder för att få plasmiden i cellerna . Cellerna analyserades med avseende på LacZ- expression av beta-galaktosidas , som även kommer att markera närvaron av insulingenen . Efter transfektion
fixering
, odlas cellerna på en plast petriskål. För analysen är tillväxtmediet avlägsnades och cellerna tvättas med fosfatbuffrad saltlösning (PBS). En färsk fixeringslösning av formaldehyd , metanol och glutaraldehyd används för att fixera cellerna i två minuter. Den fixativ avlägsnas och cellerna tvättas igen med PBS. En fräsch färgningslösning som innehåller X-gal , kalium ferri -
X-gal
cyanid och kalium ferro - cyanid till cellerna över natten. Cellerna tvättas igen med PBS , och om LacZ genen är närvarande , kommer att beta - galaktosidas ha klöv X - gal och cellerna blir blå .
