Forskare övervakar rutinmässigt celltillväxt . Det kan vara en del av vanlig cell underhåll , eller som del av ett experiment. Till exempel skulle ett experiment inrättas för att jämföra effekten av att tre olika droger på tillväxten av celler. I detta fall är fyra kolvar av celler i samma koncentration inrättats, en utan några droger som en kontroll , och en för varje av de tre drogerna . Cellerna avlägsnas från kolvarna med jämna mellanrum , till exempel daglig , räknades och registrerades . De cellantal plottas i ett diagram mot tiden , effekterna av läkemedlen på celltillväxt kan jämföras med kontrollen. Saker du behöver
Celler i suspension
Provrör
Pipetter
Tillväxtmedium
hemacytometer
täckglas
Hand trådräknare
Lens papper
Trypanblått
Mikroskop
Visa fler instruktioner
Cells
1 celler
snurra försiktigt för att få en jämn suspension . Ta bort en volym av celler, såsom 1,0 milliliter ( ml) , med en pipett och överför till ett provrör. Späd celler för att ge 100.000 till 500.000 celler per ml - detta bör ge de cirka 100 celler som krävs för statistisk signifikans när man räknar
2
Späd celler , om nödvändigt , genom att tillsätta 9,0 ml medium till . 1,0 ml celler . Blanda och spela utspädningen . Om celler fortfarande alltför koncentrerad , avlägsna 1,0 ml utspädda celler till ett nytt rör , tillsätt 9,0 ml medium , blanda och registrera utspädning. Däggdjursceller växer oftast i intervallet 100.000 till 5.000.000 per ml , bör så 0 och 2 utspädningar vara tillräcklig .
3
Blanda cellerna från den slutliga utspädningen . Avlägsna en liten volym , såsom 0,1 ml , och placera i ett nytt rör. Tillsätt en motsvarande volym av trypanblått , blanda och registrera utspädning. Döda celler tar upp trypanblått och visas blått under mikroskop .
Räkna
4
Polera hemacytometer och täckglas med objektivet papper , och plats täckglas på hemocytameter rutnät . Lägg en droppe av utspädda celler till V-form intill gallret . Cellflyttningen under täckglaset med kapillärkraft .
5
Placera bilden på mikroskopet , fokusera på nätet och använda handen trådräknare räkna livskraftiga , inte blå , celler . Celler bör inte överlappa , om alltför tät , utför en annan spädning . Om celler alltför utspädd , förbereda en mer koncentrerad prov .
6
Avlägsna hemacytometer , rent , ladda och räkna igen . Räkna varje cellprov tre gånger .
Beräkning
7
Beräkna antalet celler per ml . Den hemacytometer Grid är indelad i nio stora rutor , vardera med en volym på 0,1 ml .
8
Dividera antalet celler räknade med antalet stora begagnade rutor ( nio om du använder hela nätet ) , och multiplicera med 10.000 för att få celler per ml . Multiplicera med utspädningsfaktorn ( er ) för den slutliga koncentrationen .
9
Anteckna datum , prov , celltal , utspädningsfaktorer och sista cell nummer per ml . Förbered en graf av cellantal plottas mot tiden för att visa celltillväxt .
